A análise ambiental de nascentes pode ser entendida como um método para a verificação da qualidade do ambiente no seu entorno, e possíveis impactos na qualidade das águas e na sua viabilidade para consumo humano. O presente estudo objetivou analisar nove nascentes na zona rural do município de Cunha Porã/SC, utilizadas para abastecimento humano. Para tanto, foi realizada avaliação ambiental macroscópica e foram analisados parâmetros físico-químicos e microbiológicos da qualidade da água: pH, nitrogênio total, fósforo total, oxigênio dissolvido, 2,4 – D, Glifosato, Atrazina, turbidez, temperatura, condutividade elétrica, coliformes totais e Escherichia coli. Foi verificado o não cumprimento da legislação vigente no que tange as Áreas de Preservação Permanente e possíveis impactos ambientais associados. Com relação à qualidade, as águas das nascentes se apresentaram como não potáveis, devido à presença de 2,4-D e Atrazina acima dos limites para potabilidade, bem como a positividade de Escherichia coli em 100% das amostras. Sendo assim, há potencial risco à saúde da população que faz uso da água dessas nascentes.