Marek's disease virus (MDV) causes an acute lymphoproliferative disease in chickens, resulting in T cell lymphomas in visceral organs and peripheral nerves. Earlier studies have determined that the repeat regions of oncogenic serotype 1 MDV encode a basic leucine zipper protein, Meq, which structurally resembles the Jun/Fos family of transcriptional activators. Meq is consistently expressed in MDV-induced tumor cells and has been suggested as the MDV-associated oncogene. To study the function of Meq, we have generated an rMd5ΔMeq virus by deleting both copies of themeqgene from the genome of a very virulent strain of MDV. Growth curves in cultured fibroblasts indicated that Meq is dispensable forin vitrovirus replication.In vivoreplication in lymphoid organs and feather follicular epithelium was also not impaired, suggesting that Meq is dispensable for lytic infection in chickens. Reactivation of the rMd5ΔMeq virus from peripheral blood lymphocytes was reduced, suggesting that Meq is involved but not essential for latency. Pathogenesis experiments showed that the rMd5ΔMeq virus was fully attenuated in chickens because none of the infected chickens developed Marek's disease-associated lymphomas, suggesting that Meq is involved in lymphocyte transformation. A revertant virus that restored the expression of themeqgene, showed properties similar to those of the parental virus, confirming that Meq is involved in transformation but not in lytic replication in chickens.

The concept of pathotype in Marek's disease (MD) probably dates from the recognition of a more virulent form of the disease in the late 1950s (Benton & Cover, 1957 Benton, WJ and Cover, MS . (1957). The increased incidence of visceral lymphomatosis in broiler and replacement birds. Avian Diseases, 1: 320–327. [Google Scholar] ). Distinctions between MD virus strains were further expanded with the description of the vv pathotype in the early 1980s and of the vv+ pathotype in the 1990s. Pathotype designations reflect important biological properties that correlate with the break-through of vaccinal immunity in the field. However, pathotyping methods applied by various laboratories have not been uniform, preventing critical comparison of results. Better uniformity of pathotyping procedures is desirable. The Avian Disease and Oncology Laboratory (ADOL) method is based on induction of lymphoproliferative lesions in vaccinated chickens. This method has been used to pathotype more than 45 isolates and is the basis for the current pathotype classification of MD virus strains. Its limitations include requirements for a specific type of chickens (15×7 ab+), large numbers of animals, and a statistical method to compare lesion responses to those of JM/102W and Md5 control strains. Because of these limitations, it has not been and is not likely to be used in other laboratories. Comparability in pathotyping can be improved by the comparison of field isolates with standard prototype strains such as JM/102W, Md5 and 648A (American Type Culture Collection) or their equivalents. Data may be generated by different in vivo procedures that measure tumour induction, neurological disease (both neoplastic and non-neoplastic lesions), or solely non-neoplastic criteria (such as lymphoid organ weights or virus replication). Methods based on neoplastic criteria, especially when generated in MD-immunized chickens, will probably correlate most closely with that of the ADOL method and be most relevant to evolution of MD virus in the field. Based on data from several trials, a modification of the ADOL method that utilizes fewer chickens and can be conducted with commercial specific pathogen free strains is proposed. The modified method is based on “best fit” comparisons with prototype strains, and is expected to provide results generally comparable with the original method. A variety of other alternative criteria (see earlier) are also evaluated both for primary pathotyping and as adjuncts to other pathotyping methods. Advantages and disadvantages of alternative methods are presented. Le concept de pathotype pour la maladie de Marek (MD) date probablement de l'identification d'une forme plus virulente de la maladie à la fin des années 1950 (Benton & Cover, 1957). Les distinctions entre les souches de virus de la MD (MDV) ont été développées plus tardivement avec la description des pathotypes très virulents (vv) au début des années 1980 et des hypervirulents (vv+) dans les années 1990. Les désignations de pathotype reflètent des propriétés biologiques importantes qui correspondent au franchissement de l'immunité vaccinale sur le terrain. Cependant les méthodes de pathotypage, mises en pratique dans différents laboratoires, n'ont pas été les mêmes empêchant la comparaison critique des résultats. Une meilleure harmonisation des procédures de pathotypage est souhaitable. La méthode du Laboratoire des Maladies Aviaires et d'Oncologie (ADOL) est basée sur l'induction des lésions lymphoprolifératives chez les poulets vaccinés. Cette méthode a été utilisée pour pathotyper plus de 45 souches et est la base de la classification actuelle par pathotype des souches de MDV. Les limites de cette méthode incluent les exigences en ce qui concerne le type de poulets (15x7 ab+), un nombre important d'animaux, et une méthode statistique pour comparer les réponses lésionnelles à celles des souches témoins JM/102W et Md5. Du fait de ces limites, cette méthode n'a pas été utilisée dans d'autres laboratoires, et ne sera probablement pas. La comparabilité du pathotypage peut être améliorée par la comparaison des souches du terrain à des souches prototype standard, telles la JM/102W, la Md5 et la 648A (American Type Culture Collection) ou à des souches équivalentes. Les données peuvent être générées par différentes procédures in vivo qui mesurent l'induction des tumeurs, la maladie neurologique (les lésions néoplastiques et non-néoplastiques), ou seulement les critères non-néoplastiques (tel les poids des organes lymphoïdes ou la réplication virale). Les méthodes basées sur les critères néoplastiques, particulièrement quand ils apparaissent chez des poulets immunisés MD, devraient probablement correspondre plus étroitement à celles de la méthode d'ADOL et être plus en rapport avec l'évolution des virus sur le terrain. A partir des données de plusieurs essais, une modification de la méthode de l'ADOL est proposée. Elle utilise moins de poulets et peut être réalisée avec des variétés commerciales de poulets SPF. Cette méthode modifiée est basée sur de meilleures comparaisons des souches prototypes, et on peut s'attendre à fournir des résultats généralement comparables à ceux de la méthode originale. D'autres critères alternatifs (Cf.supra) sont également évalués aussi bien pour le premier pathotypage que comme compléments à d'autres méthodes de pathotypage. Les avantages et les inconvénients de ces méthodes alternatives sont présentés. Der Begriff des Pathotyps bei der Marekschen Krankheit (MK) entstand wahrscheinlich im Zusammenhang mit dem Auftreten einer virulenteren Form der Erkrankung in den späten 1950iger Jahren (Benton &Cover, 1957). Die Unterscheidung zwischen verschiedenen MK-Virus (MKV)-Stämmen wurde mit der Beschreibung des vv-Pathotyps in den frühen 1980iger Jahren und des vv+-Pathotyps in den 1990iger Jahren weiter ausgedehnt. Diese Pathotypbezeichnungen reflektieren wichtige biologische Eigenschaften, die mit Impfdurchbrüchen im Feld im Zusammenhang stehen. Die Pathotypisierungsmethoden in verschiedenen Laboratorien waren jedoch nicht einheitlich, was einen tatsächlichen Vergleich der Ergebnisse bislang verhinderte. Aus diesem Grund ist die Vereinheitlichung der Pathotypisierungsverfahren wünschenwert. Die Methode des ,Laboratoriums für Vogelkrankheiten und –onkologie‘ (Avian Disease and Oncology Laboratory (ADOL)) basiert auf der Induktion lymphoproliferativer Läsionen in vakzinierten Hühnern.. Diese Methode wurde für die Pathotypisierung von mehr als 45 Isolaten verwendet und ist die Basis für die derzeitige Pathotyp-Klassifizierung von MKV-Stämmen. Ihre Anwendung ist eingeschränkt aufgrund des Erfordernis eines bestimmten Hühnertyps (15x7 ab+), einer großen Anzahl von Versuchstieren und einer statistischen Methode, die den Vergleich der auftretenden Läsionen mit denjenigen durch die Kontrollstämme JM/102W und Md5 ermöglicht. Aufgrund dieser Einschränkungen war und ist diese Methode nicht für die Anwendung in anderen Laboratorien geeignet. Die Vergleichbarkeit der Pathotypisierung kann durch den Vergleich von Feldisolaten mit Standardprototypstämmen wie JM/102W, Md5 und 648A (American Type Culture Collection) oder ihrer Äqivalente verbessert werden. Die entsprechenden Daten können durch zwei verschiedene in vivo-Verfahren gewonnen werden, die entweder die Tumorinduktion und die neurologische Erkrankung (sowohl neoplastische als auch nicht-neoplastische Veränderungen) oder nur nicht-neoplastische Kriterien (wie Gewicht der lymphatischen Organe oder Virusreplikation) ermitteln. Ergebnisse, die auf der Bestimmung neoplastischer Kriterien basieren, insbesondere wenn sie in MK-immunisierten Hühnern durchgeführt werden, werden wahrscheinlich am ehesten mit den nach der ADOL-Methode erhobenen Daten korrelieren und für die Beurteilung der Evolution des MKV im Feld von größter Bedeutung sein. Basierend auf den Daten von verschiedenen Untersuchungen wird eine Modifizierung der ADOL-Methode, bei der weniger Hühner verwendet werden, die außerdem aus kommerziellen SPF-Stämmen sein können, vorgeschlagen. Die modifizierte Methode basiert auf _”Best Fit“-Vergleichen mit den Prototypstämmen, d.h. mit welchem Prototyp gibt es die größte Übereinstimmung in den Befunden, und es wird erwartet, dass sie Ergebnisse erbringt, die mit denen der Originalmethode generell vergleichbar sind. Eine Vielzahl von anderen Alternativkriterien (siehe oben) wurden ebenfalls auf ihre Eignung sowohl für die Primärpathotypisierung als auch als Ergänzung zu anderen Pathotypisierungsmethoden beurteilt. Vor- und Nachteile dieser Alternativmethoden werden erläutert. El concepto de patotipo en la enfermedad de Marek (MD) data probablemente de finales de los 1950s cuando se reconoció una forma más virulenta de enfermedad (Benton y Cover, 1957). Las distinciones entre las diferentes cepas de virus de MD (MDV) fueron aún mayores al describirse el patotipo vv a principios de los ochenta y el vv+ en los noventa. La designación de patotipo refleja propiedades biológicas importantes que se correlacionan con la capacidad de romper la inmunidad maternal en el campo. A pesar de ello, los métodos de clasificación de los diferentes patotipos en varios laboratorios no han sido uniformes, lo cual ha impedido una comparación crítica de los resultados. El método utilizado en el Avian Disease and Oncology Laboratory (ADOL) se basa en la inducción de lesiones linfoproliferativas en pollos vacunados. Este método ha sido utilizado para clasificar más de 45 aislados y es la base para la clasificación actual de los patotipos de cepas de MDV. Las limitaciones de este método son varias: necesidad de un tipo específico de pollos (15x7 ab+), uso de un gran número de animales y de un método estadístico para comparar las respuestas lesionales con las de las cepas control JM/102W y Md5. Debido a estas limitaciones no ha sido y no es probablemente usado en otros laboratorios. La comparación en el patotipado puede ser mejorada mediante la comparación de aislados de campo con cepas prototipo como las JM/102W, Md5 y 648A (American Type Culture Collection) o sus equivalentes. Los datos pueden ser generados mediante diferentes procedimientos in vivo que miden la inducción de tumores, enfermedad neurológica (por lesiones neoplásicas o no neoplásicas), o únicamente por criterios no neoplásicos (como el peso de los órganos linfoides o la replicación vírica). Los métodos basados en criterios neoplásicos, especialmente cuando son generados en pollos inmunizados de MD, probablemente se correlacionarán mejor con el método del ADOL y serán más relevantes en cuanto a la evolución de los virus de MD en el campo. En base a los datos de diferentes experimentos, se propone una modificación del método ADOL que utiliza menos animales y puede ser llevado a cabo en pollos SPF comerciales. El método modificado se basa en una comparación con el que mejor clasifica las cepas prototipo, y se espera que de resultados en general comparables con el método original. Otros criterios alternativos (ver abajo) también se evalúan como métodos primarios de patotipificación o como adjuntos a otros métodos de patotipificación. Se presentan las ventajas y desventajas de estos métodos alternativos.

Marek's disease virus (MDV) genetics has lagged behind that of other herpesviruses because of the lack of tools for the introduction of site-specific mutations into the genome of highly cell-associated oncogenic strains. Overlapping cosmid clones have been successfully used for the introduction of mutations in other highly cell-associated herpesviruses. Here we describe the development of overlapping cosmid DNA clones from a very virulent oncogenic strain of MDV. Transfection of these cosmid clones into MDV-susceptible cells resulted in the generation of a recombinant MDV (rMd5) with biological properties similar to the parental strain. To demonstrate the applicability of this technology for elucidation of gene function of MDV, we have generated a mutant virus lacking an MDV unique phosphoprotein, pp38, which has previously been associated with the maintenance of transformation in MDV-induced tumor cell lines. Inoculation of Marek's disease-susceptible birds with the pp38 deletion mutant virus (rMd5Δpp38) revealed that pp38 is involved in early cytolytic infection in lymphocytes but not in the induction of tumors. This powerful technology will speed the characterization of MDV gene function, leading to a better understanding of the molecular mechanisms of MDV pathogenesis. In addition, because Marek's disease is a major oncogenic system, the knowledge obtained from these studies may shed light on the oncogenic mechanisms of other herpesviruses.

SUMMARY A healthy immune system is a cornerstone for poultry production. Any factor diminishing the immune responses will affect production parameters and increase cost. There are numerous factors, infectious and noninfectious, causing immunosuppression (IS) in chickens. This paper reviews the three viral diseases that most commonly induce IS or subclinical IS in chickens: Marek's disease virus (MDV), chicken infectious anemia virus (CIAV), and infectious bursal disease virus (IBDV), as well as the interactions among them. MDV-induced IS (MDV-IS) affects both humoral and cellular immune responses. It is very complex, poorly understood, and in many cases underdiagnosed. Vaccination protects against some but not all aspects of MDV-IS. CIAV induces apoptosis of the hemocytoblasts resulting in anemia, hemorrhages, and increased susceptibility to bacterial infections. It also causes apoptosis of thymocytes and dividing T lymphocytes, affecting T helper functions, which are essential for antibody production and... RESUMEN Estudio Recapitulativo- Inmunosupresión inducida por virus en pollos. Un sistema inmune de las aves saludable es primordial en la producción avícola. Cualquier factor que disminuya las respuestas inmunitarias afectará los parámetros de producción y aumentará los costos de producción. Existen numerosos factores, infecciosos y no infecciosos, que causan inmunodepresión en los pollos. Este artículo revisa las tres enfermedades virales que inducen con mayor frecuencia inmunodepresión clínica o subclínica en pollos, los cuales son: el virus de la enfermedad de Marek (MDV), el virus de la anemia infecciosa del pollo (CIAV) y el virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa (IBDV), así como las interacciones entre ellos. La inmunodepresión inducida por el virus de Marek (MDV-IS) afecta las respuestas inmunitarias tanto humorales como celulares. Es muy compleja, poco conocida y en muchos casos, no se diagnostica adecuadamente. La vacunación protege contra algunos, pero no contra todos los aspectos de la i...

Marek's disease virus has a unique phosphoprotein, pp38, which is suspected to play an important role in Marek's disease pathogenesis. The objective of the present study was to utilize a mutant virus lacking the pp38 gene (rMd5Δpp38) to better characterize the biological function of pp38. This work shows that the pp38 gene is necessary to establish cytolytic infection in B cells but not in feather follicle epithelium, to produce an adequate level of latently infected T cells, and to maintain the transformed status in vivo.