Asymmetric PCR and DNA melting analysis with TaqMan probes applied for mutation detection is effectively used in clinical diagnostics. The method is simple, cost-effective, and carried out in a closed-tube format, minimizing...

Cystic fibrosis (CF) is an autosomal recessive disorder caused by mutations in the CFTR gene. Currently, CFTR modulators are the most effective treatment for CF; however, they may not be suitable for all patients. A representative and convenient in vitro model is needed to screen therapeutic agents under development. This study, on the most common mutation, F508del, investigates the efficacy of human induced pluripotent stem cell-derived lung organoids (hiLOs) from NKX2.1+ lung progenitors and airway basal cells (hiBCs) as a 3D model for CFTR modulator response assessment by a forskolin-induced swelling assay. Weak swelling was observed for hiLOs from NKX2.1+ lung progenitors and hiBCs in response to modulators VX-770/VX-809 and VX-770/VX-661, whereas the VX-770/VX-661/VX-445 combination resulted in the highest swelling response, indicating superior CFTR function restoration. The ROC analysis of the FIS assay results revealed an optimal cutoff of 1.21, with 65.9% sensitivity and 71.8% specificity, and the predictive accuracy of the model was 76.4%. In addition, this study compared the response of hiLOs with the clinical response of patients to therapy and showed similar drug response dynamics. Thus, hiLOs can effectively model the CF pathology and predict patients’ specific response to modulators.

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) was successfully generated from skin fibroblast obtained from patient with cystic fibrosis by using non-integrating, viral CytoTune™-iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit, which contain three vectors preparation: polycistronic Klf4-Oct3/4-Sox2, cMyc, and Klf4. Created iPSC lines showed a normal karyotype, expressed pluripotency markers and demonstrated the potential to differentiate into three germ layers in spontaneous differentiation assay.

We generated two human induced pluripotency stem cell (hiPSC) lines, RCMGi011-A and 11-B, from skin fibroblast from patient with Mucopolysaccharidosis IV B type and autosomal recessive non-syndromic hearing loss 12 using non-integrating, viral CytoTune™-iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit. We verified variant c.808 T > G and insertion in GLB1 gene, as well as two mutations, c.6992 T > C and c.805C > T, in CDH23 gene which lead to autosomal recessive hearing loss type 12. We have demonstrated normal karyotype of hiPSCs and capacity for cell differentiation into three germ layers.

Натуральные киллеры (NK) и NKT-лимфоциты являются важными составляющими врожденного иммунитета и играют роль первой линии защиты от онкологических заболеваний. Данные популяции отличаются высокой гетерогенностью и разделяются на несколько субпопуляций, отличающихся по степени экспрессии маркеров CD56 и CD16 и функциональной активностью. Исследование гетерогенности данных популяций лимфоцитов у здоровых доноров актуально, так как является основой для изучения нарушений баланса между различными субпопуляциями у онкологических больных. Изменения соотношения выше представленных субпопуляций могут обладать прогностическим и клиническим значением при опухолевых заболеваниях. Было проведено исследование лимфоцитов периферической крови 50 здоровых доноров. При анализе популяции NK-лимфоцитов было выявлено 18,0±11,3% антиген-положительных клеток, колебания значений составило от 7,6 до 29,2%, в то время как количество клеток с фенотипами CD3^-CD56⁺ и CD3^-CD16⁺ было равно 16,2±8,1 и 11,0±6,7% соответственно. Анализ субпопуляционной структуры показал, что основной пул NK-клеток представлен CD56^dimCD16^dim клетками 52,3±19,9%, а минорные субпопуляции CD56^dimCD16^bright, CD56^-CD16⁺, CD56^brightCD16 составляют 0,3±0,2, 1,7±0,9 и 1,3±0,6% соответственно. При исследовании внутриклеточного содержания перфорина оказалось, что количество CD56⁺Perf⁺ клеток в среднем равно 25,1±14,8%, а CD16⁺Perf⁺ – 23,8±16,0%. Цитометрический анализ показал, что перфорин преимущественно содержится в CD56^dimCD16^dim NK-лимфоцитах, в то время как CD56^dimCD16^bright, CD56^-CD16⁺, CD56^brightCD16^- перфорина не содержали. В работе впервые обнаружена субпопуляция NK-клеток с иммунофенотипом СD56^dimCD16^dim, не содержащая внутриклеточный перфорин (2,0%). Популяция NKT-клеток с фенотипом СD3⁺CD16/СD56⁺ выявляется в 7,1% (25% – 3,45; 75% – 8,75) антиген-положительных клеток в диапазоне от 2,5 до 11,9% и не подчиняется законам нормального распределения. При анализе с помощью комбинации МКА CD3/CD56/CD16 количество CD3⁺CD56⁺ клеток составило 4,33% (25% – 2,25; 75% – 7,3), а количество CD3⁺CD16⁺ – 3,087% (25% – 0,9; 75% – 6,2). Оказалось, что различия между определением с помощью тест-системы CD3/CD16/CD56 и с помощью CD3/CD16 является статистически значимой (p < 0,05). Было показано, что основной пул NKT-клеток составляют CD56⁺CD16^- клетки, количество которых 5,45% (25% – 2,95; 75% – 7,3) среди CD3⁺ лимфоцитов. При этом были выявлены две минорные субпопуляции, отличающиеся по экспрессии антигенов CD56 и CD16. Так уровень CD56^-CD16⁺ составил 3% (25% – 0,25; 75% – 3,05), а количество CD56⁺CD16⁺ оказалось равным 0,67% (25% – 0,25; 75% – 0,9). Таким образом, широкое фенотипическое разнообразие NK- и NKT- клеток отражает их способность к реализации различной функциональной активности. Данное исследование, указывающее на высокую гетерогенность NK- и NKT-лимфоцитов, может послужить основой для изучения нарушений баланса между различными субпопуляциями этих клеток у онкологических больных.