Both chromosomal stability and instability are important in generating genotypes useful for plant genetic improvement. In the genus Haworthia the basic chromosome number is 7, with four large chromosomes and three small. The aim of this study was to analyze the stability and instability of chromosomes in dedifferentiated and redifferentiated Haworthia tissues under in vitro conditions. Leaf segments of H. marumiana var. batesiana, H. fasciata var. major, and H. limifolia var. ubomboensis were cultured in Eriksson basal medium supplemented with naphthalene acetic acid (NAA) 2 mg L-1 + benzylaminopurine (BA) 1.0 mg L-1. NAA 5.0 mg L-1 + BA 1.0 mg L-1, or 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) 5.0 mg L-1 + kinetin 1.0 mg L-1. Cytogenetic analysis showed greater chromosomal stability in re-differentiated root cells cultured with 5.0 mg L-1 of NAA + 1.0 mg L-1 of BA, by showing no variation in chromosome number (2n = 2x =14) and morphology in H. marumiana var. batesiana and H. fasciata var. major. Dedifferentiated callus cells had greater variation in chromosome number and morphology compared to redifferentiated root cells. The highest instability was observed with 5.0 mg L-1 of 2,4-D + 1.0 mg L-1 of kinetin, due to the lower retention of diploid number, the generation of aneuploidy and polyploidy with chromosome numbers of 13, 15, 24, 26, 27 and 28, and changes in chromosome morphology from acrocentric to metacentric forms. The variation in responses between and within species to the factors used (type and dosage of growth regulators, callus phase, subculture maintenance) showed that genotype plays a crucial role in the conservation of chromosome number and morphology, offering the opportunity to perform in vitro selection of clonal genotypes or new variants for genetic improvement of plants. Tanto la estabilidad como la inestabilidad cromosómica son importantes en la generación de genotipos útiles para el mejoramiento genético de plantas. En el género Haworthia el número cromosómico básico es 7, con cuatro cromosomas grandes y tres pequeños. El objetivo de este estudio fue analizar la estabilidad e inestabilidad de los cromosomas en tejidos desdiferenciados y rediferenciados de Haworthia bajo condiciones in vitro. Segmentos de hojas de H. marumiana var. batesiana, H. fasciata var. major y H. limifolia var. ubomboensis fueron cultivados en medio basal Eriksson suplementado con ácido naftalenacético (ANA) 2 mg L-1 + bencilaminopurina (BA) 1.0 mg L-1; ANA 5.0 mg L-1 + BA 1.0 mg L-1, o ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) 5.0 mg L-1 + cinetina 1.0 mg L-1. El análisis citogenético mostró mayor estabilidad cromosómica en células de raíces rediferenciadas cultivadas con 5.0 mg L-1 de ANA + 1.0 mg L-1 de BA al no mostrar variación del número (2n = 2x = 14) y morfología de cromosomas en H. marumiana var. batesiana y H. fasciata var. major. Las células de callo desdiferenciado tuvieron mayor variación del número y morfología de cromosomas en comparación con células de raíces rediferenciadas. La mayor inestabilidad se observó con 5.0 mg L-1 de 2,4-D + 1.0 mg L-1 de cinetina debido a la menor conservación del número diploide, generación de aneuploidía y poliploidía con números cromosómicos de 13, 15, 24, 26, 27 y 28, y cambios en la morfología de cromosomas de acrocéntricos a metacéntricos. La variación de las respuestas entre y dentro especies a los factores empleados (tipo y dosis de reguladores de crecimiento, fase de callo, mantenimiento de subcultivos) mostró que el genotipo juega un papel crucial en la conservación del número y morfología de los cromosomas, lo cual ofrece la oportunidad de realizar selección in vitro de genotipos clonales o de nuevas variantes para el mejoramiento genético de plantas.