O mofo verde é causado por Penicillium digitatum, a doença afeta 90% da produção no período pós-colheita resultando em perda total dos frutos. O objetivo consistiu em isolar o Penicillium sp. e submetê-lo aos ensaios in vitro e in vivo com a kombucha. O fungo foi caraterizado morfologicamente, a gelatina foi uma alternativa conjunta a kombucha, testada nos ensaios in vitro (1%, 2%, 3%, 4% e 5%). A kombucha foi submetida aos ensaios nas concentrações de 50%, 60%, 70%, 80% e 100%, no controle positivo (CP) usou-se água destilada autoclavada e no controle negativo (CN) utilizou-se, Tiofanato metílico (2%). Nos testes in vivo, fez-se, o uso das mesmas concentrações de kombucha testadas in vitro. No teste de confronto direto, utilizou-se, a kombucha (50% e 100%), mais os frutos controle. Os resultados da metagenômica indicaram os gêneros Komagotaeibacter e Pichiaceae sp. como dominantes na kombucha. Nos testes in vitro, a kombucha apresentou inibição sobre Penicillium sp., sendo este efeito evidente a partir do quarto dia de avaliação. A gelatina exerceu efeito inibitório sobre Penicillium sp., com inibição significativa no décimo dia, com crescimento inferior ao controle positivo. A kombucha com gelatina (1%) foi eficaz em inibir o crescimento de Penicillium sp., o efeito inibitório foi estatisticamente significativo em comparação com os controles positivo e negativo. No teste in vivo, todas as concentrações resultaram em uma supressão total da progressão da doença, diferindo do Controle Positivo e Controle Negativo, que apresentou uma progressão intermediária da doença. No ensaio de confronto direto, a kombucha foi altamente eficaz, sendo, a progressão da doença zero sob essas condições de tratamento. O estudo demonstrou resultados que revelam o potencial da kombucha como biofungicida no controle de Penicillium sp., sendo, uma alternativa sustentável e promissora em controlar 100% o desenvolvimento do mofo verde em frutas de laranja.