La composición y concentración del sustrato carbonado condicionan el desempeño de Saccharomyces cerevisiae y pueden modificar simultáneamente la velocidad de fermentación, el rendimiento de conversión y la estabilidad fisiológica. El objetivo fue determinar el efecto de cuatro perfiles de azúcares fermentables (glucosa, fructosa, mezcla glucosa:fructosa 50:50 y sacarosa) y dos concentraciones iniciales (120 y 180 g L⁻¹) sobre la fermentación alcohólica. Se empleó un diseño completamente aleatorizado con arreglo factorial 4 × 2, cuatro réplicas biológicas y seguimiento a 0, 12, 24, 36, 48 y 72 h. Se cuantificaron azúcar residual, etanol, dióxido de carbono, biomasa, pH, acidez y viabilidad; posteriormente se calcularon rendimiento Yp/s, productividad, atenuación, fase de latencia e índice de estabilidad. El perfil, la concentración y su interacción afectaron la producción de etanol (p < 0,001; p < 0,001 y p = 0,012, respectivamente). A 180 g L⁻¹, la mezcla glucosa:fructosa produjo 69,62 ± 0,99 g L⁻¹ de etanol y alcanzó un rendimiento de 0,472 ± 0,007 g g⁻¹, superando los perfiles individuales. El aumento de la concentración inicial incrementó el etanol absoluto, pero redujo la atenuación y la estabilidad, lo que evidenció un compromiso entre productividad y robustez del proceso. La fructosa presentó mayor fase de latencia y menor atenuación, coherente con restricciones de transporte y utilización de hexosas. Los resultados demuestran que el perfil de azúcares, y no únicamente su concentración total, constituye un factor de diseño relevante para optimizar fermentaciones alcohólicas.