Recent research has revealed the calcium signaling significance in the production of cellulases in Trichoderma reesei. While vacuoles serve as the primary calcium storage within cells, the function of vacuolar calcium transporter proteins in this process remains unclear. In this study, we conducted a functional characterization of four vacuolar calcium transport proteins in T. reesei. This was accomplished by the construction of the four mutant strains ∆trpmc1, ∆tryvc1, ∆tryvc3, and ∆tryvc4. These mutants displayed enhanced growth when subjected to arabinose, xylitol, and xylose. Furthermore, the mutants ∆trpmc1, ∆tryvc1, and ∆tryvc4 showed a reduction in growth under conditions of 100 mM MnCl₂, implying their role in manganese resistance. Our enzymatic activity assays revealed a lack of the expected augmentation in cellulolytic activity that is typically seen in the parental strain following the introduction of calcium. This was mirrored in the expression patterns of the cellulase genes. The vacuolar calcium transport genes were also found to play a role in the expression of genes involved with the biosynthesis of secondary metabolites. In summary, our research highlights the crucial role of the vacuolar calcium transporters and, therefore, of the calcium signaling in orchestrating cellulase and hemicellulase expression, sugar utilization, and stress resistance in T. reesei.

Introdução: A imunofluorescência é uma técnica que permite marcar de forma específica estruturas ou moléculas de interesse e, portanto, é muito utilizada como ferramenta para estudos em diversas áreas do conhecimento. Associada à microscopia confocal, é possível visualizar com nitidez pequenos detalhes nas células, fazer reconstruções tridimensionais, estudos de colocalização, alterações de expressão ou movimentação de moléculas, dentre muitos outros estudos. Porém o bom resultado destes experimentos depende da qualidade com que são realizados. Objetivo: oferecer conhecimentos básicos sobre Imunofluorescência e Microscopia Confocal através de aulas teóricas e práticas. Metodologia: O curso foi disponibilizado a funcionários com ensino médio completo, estudantes de iniciação científica e pós-graduação como parte das Atividades de Inverno e dividido em 4 horas de aulas teóricas e 16 horas de aulas práticas, nas quais foram abordados fundamentos de imunofluorescência e Microscopia Confocal. Resultados: Através das perguntas durante as aulas teóricas e práticas, observamos as dificuldades encontradas e discutimos soluções para elas. Ao término do curso, os participantes preencheram um questionário de avaliação, no qual as sugestões de melhoria do curso deixadas pelos participantes foram de grande valia para que pudéssemos aprimorá-lo. Conclusão: A evolução do entendimento dos alunos durante as aulas, nos mostrou que a proposta do curso de fornecer conhecimentos básicos teóricos e práticos foi atingida. Do outro lado, nós como ministrantes também aprendemos muito com as dúvidas e sugestões que surgiram. Esta troca de conhecimentos beneficia a todos.