A Tristeza Parasitária Bovina (TPB) e a tripanossomose bovina são enfermidades que impactam a produção bovina de forma negativa no Brasil, causando perdas na produção e morte dos animais. Neste estudo, o objetivo foi investigar os quatro hemoparasitos que mais acometem o rebanho bovino (A. marginale, B. bovis, B. bigemina e T. vivax) pela técnica de qPCR, em vacas leiteiras de descarte na região noroeste do Rio Grande do Sul. Para isso, foram coletados, em abatedouro, fragmentos de cérebro e de baço de 64 bovinos leiteiros dessa região. A extração do DNA das amostras foi feita por meio do reagente Brazol®, e a quantidade e a pureza das mesmas, foi obtida através da análise de espectrofotômetro com NanoDropTM. Nas amostras de cérebro foi realizada a detecção de DNA para T. vivax e B. bovis, enquanto que no baço, investigou-se DNA dos quatro agentes. Das 64 amostras de cérebro analisadas, 14,06 % foram positivas para Babesia bovis. Nas amostras de baço, Babesia bovis foi detectada em 17,19 %, enquanto que 29,69 % testaram positivas para B. bigemina e, 37,50 %, para Anaplasma marginale. Em relação ao Trypanosoma vivax, nenhuma resultou positiva em ambos os tecidos. Assim, os achados evidenciaram que B. bovis, B. bigemina e A. marginale estão presentes no rebanho bovino leiteiro, tendo maior percentual de A. marginale na região investigada; por outro lado, T. vivax não foi diagnosticado no presente estudo.