Background: Hepatitis E virus (HEV) is a zoonotic virus transmitted by pig meat and responsible for chronic hepatitis E in immunocompromised patients. It has proved challenging to reproduce this disease in its natural reservoir. We therefore aimed to develop a pig model of chronic hepatitis E to improve the characterization of this disease. Methods: Ten pigs were treated with a tacrolimus-based regimen and intravenously inoculated with HEV. Tacrolimus trough concentration, HEV viremia, viral diversity, innate immune responses, liver histology, clinical disease and biochemical markers were monitored for 11 weeks post-infection (p.i.). Results: HEV viremia persisted for 11 weeks p.i. HEV RNA was detected in the liver, small intestine, and colon at necropsy. Histological analysis revealed liver inflammation and fibrosis. Several mutations selected in the HEV genome were associated with compartmentalization in the feces and intestinal tissues, consistent with the hypothesis of extrahepatic replication in the digestive tract. Antiviral responses were characterized by a downregulation of IFN pathways in the liver, despite an upregulation of RIG-I and ISGs in the blood and liver. Conclusions: We developed a pig model of chronic hepatitis E that reproduced the major hallmarks of this disease. This model revealed a compartmentalization of HEV genomes in the digestive tract and a downregulation of innate immune responses in the liver. These original features highlight the relevance of our model for studies of the pathogenesis of chronic hepatitis E and for validating future treatments. Export

The hepatitis E virus (HEV) is a leading cause of acute hepatitis worldwide. Although most infections are self-limiting, zoonotic genotypes can persist in immunocompromised individuals. Transmitted via the fecal-oral route, HEV has been suggested to directly infect the intestinal epithelium, a tissue with high regenerative capacity. Here, we demonstrate that HEV predominantly infects proliferative transit-amplifying and intestinal stem cells within the crypts of human pluripotent stem cell–derived intestinal organoids (hIOs). Supporting this, we detected HEV RNA in the intestinal crypts of an HEV-infected patient. We further found that HEV infection spreads through cell division and is maintained in hIOs for more than 40 days, contrasting with acute hepatitis A virus, whose infections are rapidly cleared from hIOs. Given the self-renewal ability and metabolic constraints of proliferative intestinal progenitor cells, our findings suggest that intestinal crypts could serve as reservoirs for chronic HEV infection and highlight the intestinal crypt as a primary target for viral infection in the gastrointestinal tract.

Purpose: Hepatitis E virus (HEV) is a positive single-stranded RNA virus that causes acute and chronic hepatitis with severe complications in pregnant women and immunocompromised individuals. HEV infection manifest asymptomatically or progress to fulminant hepatitis, liver failure, and extrahepatic manifestations such as neurological disorders and renal damage. MicroRNAs are non-coding RNA molecules that play a key role in diseases and viral pathogenesis, influencing viral replication and immune evasion through their interaction with host factors. In this review, we discuss the role of microRNAs described to date in hepatitis E infection, highlighting their impact on acute, chronic, and pregnancy-related clinical outcomes. Results: miR-122, miR-214, miR-221, and miR-222 participate in the HEV replication and immune evasion, while specific miRNA profiles distinguish acute and chronic hepatitis E. HEV poses severe risks in pregnancy, with miR-431, miR-654, and miR-1468 related to self-limiting infection, and miR-450b to acute liver failure. Studying these miRNAs lead to biomarkers and therapies for hepatitis E.

Hepatitis E virus (HEV) is a zoonotic cause of acute viral hepatitis that can become chronic in immunocompromised patients. Recently, host microRNAs (miRNAs) miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-99a-5p, and miR-192-5p have been associated with acute HEV infection and with chronic HEV infection. Yet, the expression levels of miRNAs during the early phase of HEV infection remained unexplored. In this context, we aimed to identify changes in miRNA profiles occurring between the diagnosis of HEV infection and HEV cure in immunocompromised patients and in a pig model. We retrospectively included 9 immunocompromised patients with HEV infection (5 chronic and 4 resolutive) and 10 immunocompromised pigs (6 HEV-infected and 4 controls). RNAseq was retrospectively performed on pig samples. MiRNA expression was quantified by qPCR on pig and human samples.: Small RNA sequencing and targeted qPCR analyses revealed a pronounced, stage-dependent remodeling of miRNA expression during HEV infection. In patients, viral clearance was associated with early upregulation of miR-99a-5p, miR-122-5p, miR-125b-5p, and miR-194-5p, whereas progression to chronic infection was characterized by sustained downregulation of miR-23a-3p, miR-27a-3p, miR-106a-5p, miR-221-3p, and miR-223-3p. Likewise, a correlation was observed between the dysregulation of miR-181a-5p, miR-425-5p, and let-7b-5p with viral load (HEV RNA), while miR-27a-3p and miR-106a-5p were associated with ALT levels. In pigs, miR-122-5p was upregulated 10 weeks p.i., while 10 miRNAs (miR-16, miR-20a-5p, miR-23a-3p, miR-27a, miR-29a-3p, miR-140-5p, miR-181a, miR-191, miR-423-5p, and miR-99a-5p) were downregulated 11 weeks p.i. MiR-23a-3p, miR-27a, miR-99a-5p, miR-181a, and miR-425-5p were associated with HEV infection in both humans and pigs. Persistent HEV infection in immunocompromised patients and in a pig model showed partial overlap in miRNA responses. Our findings identified circulating miRNAs as stage-specific molecular markers of HEV infection in immunocompromised hosts. MiRNAs could contribute to early stratification of high-risk patients, improving outcomes for vulnerable patients facing this emerging viral disease.

Développement d'un test associé à des nanoparticules magnétiques pour le diagnostic de la tuberculose.: Mycobacterium tuberculosis provoque l'une des maladies qui présentent le taux de mortalité et de morbidité le plus élevé des Amériques et du monde. Dans les pays en développement, le diagnostic de la tuberculose (TB) repose sur la microscopie des frottis et des cultures bactériologiques. La première méthode a une faible sensibilité et la seconde met plusieurs semaines à atteindre un diagnostic de confirmation. L'absence de diagnostic rapide compromet les efforts de lutte contre la tuberculose, favorisant ainsi sa transmission à la population vulnérable. Actuellement, les nanoparticules magnétiques (MNP) fonctionnalisées par des biomolécules sont utilisées en biomédecine, en raison de leurs propriétés magnétiques, électriques et optiques. De cette manière, en appliquant des champs magnétiques externes, les MNP bio-fonctionnalisées sont utilisées pour détecter et concentrer les cellules et les biomolécules à partir d'échantillons biologiques.Dans ce travail, nous présentons la synthèse, la caractérisation et la bio-fonctionnalisation de nanoparticules magnétiques afin de développer un test ELISA en sandwich associé aux MNP, afin de détecter les antigènes de M. tuberculosis. À cette fin, des nanoparticules magnétiques ont été synthétisées par une méthode de co-précipitation. La surface des MNP a été amino-silanisée (MNP@Si@NH2) et caractérisée par des méthodes physico-chimiques.Les antigènes MTB évalués dans cette étude étaient: Hsp16.3, CFP10, ESAT6, MTC28, MPT64, protéine de 38 kDa, Ag85B et MoeX. Le clonage et l'expression de protéines recombinantes ont été réalisés dans le système de E. coli BL21 (DE3) pLysS. Des anticorps polyclonaux ont été produits chez des lapins Nouvelle-Zélande et des souris BALB/C, préalablement immunisés avec des antigènes recombinants purifiés. Des anticorps spécifiques (ab) ont été immobilisés sur les surfaces des MNP amino-silanisées. Les MNP@Si@ab ont été associées dans un test ELISA sandwich colorimétrique pour capturer et détecter les antigènes natifs du MTB à partir d’échantillons d’expectorations.La XRD, la spectroscopie Mössbauer, le potentiel zêta, la TEM et le FTIR ont validé l'obtention des MNP montrant un diamètre de cristal de diffraction de ~ 12,5 nm (10,48 ± 2,56 nm), une charge nette superficielle de +23,57 ± 2,87 mV, des profils caractéristiques de magnétite et une structure sphérique. De plus, une saturation en aimantation de 37,06 emu.g-1 a été observée. Pour la fonctionnalisation des surfaces de nanoparticules avec des anticorps, une méthode via l'utilisation d'ester activé (agent de couplage EDC/NHS) a été utilisée pour la formation de liaisons peptidiques. Des paramètres tels que le temps d'incubation, la concentration des agents de couplage et le niveau de saturation de surface des MNP amines silanisées (MNP@Si@NH2) ont déjà été standardisés.Enfin, des anticorps fonctionnalisés sur des MNP ont été utilisés pour capturer et détecter les antigènes recombinants et natifs de M. tuberculosis dans un test sandwich ELISA-MNP@Si@ab (dans un temps de réaction <4 h). Les antigènes ESAT6 et CFP10 ont été mieux différenciés dans les expectorations des patients atteints de tuberculose (fold value ~ 1,8). L'utilisation de MNP@Si@ab a amélioré la détection des antigènes du MTB dans des échantillons biologiques. Nos résultats sont encourageants, mais des évaluations supplémentaires sont nécessaire telles que la détermination de réactions croisées avec des échantillons d'expectorations provenant de patients atteints d'autres infections, la réalisation du test avec les expectorations fraîches de patients tuberculeux et la détermination de la sensibilité et de la spécificité de la méthode.