La presente investigación planteó como objetivo establecer y germinar en condiciones in vitro semillas de pitahaya naranja de Churuja (Hylocereus sp.), permitiendo obtener material vegetal joven en condiciones asépticas. Se introdujeron las semillas de pitahaya en condiciones in vitro, mediante el uso de etanol al 70% en diferentes tiempos (segundos) y se continuó su desinfección en diferentes soluciones desinfectantes (concentraciones de hipoclorito de sodio) y en diferentes periodos de tiempo (minutos). Se empleó un diseño completamente al azar (DCA), estableciéndose cinco tratamientos con 10 unidades experimentales o repeticiones por tratamiento, la unidad experimental correspondió a una placa con 15 semillas. Como resultados se observó que el mejor tratamiento permitió obtener 0% de contaminación y 100% de germinación de las semillas. En conclusión, se estableció un protocolo para el establecimiento y germinación in vitro de semillas de pitahaya naranja de Churuja (Hylocereus sp.). Mediante el uso de una solución de etanol 70% durante 1 minuto, solución de hipoclorito de sodio 2% durante 10 minutos y tres lavados en agua destilada estéril (Tratamiento T5), se logró obtener plántulas libres de contaminación (0%) y total germinación (100%) de las semillas de pitahaya naranja de Churuja.

The wild dragon fruit (Selenicereus spp.) with orange peel and fuchsia pulp, known as “Naranja de Churuja”, represents a promising plant genetic resource from the Amazonas region of Peru. The objective of this study was to develop an in vitro micropropagation protocol for this local accession by evaluating shoot induction and proliferation, in vitro rooting, and ex vitro acclimatization. During the multiplication phase, nine combinations of 6-benzylaminopurine (BAP) and indole-3-butyric acid (IBA) were evaluated using cladode segments. Shoot induction was high in most treatments (95.56–100.00%), and the combination of 2.0 mg L⁻¹ BAP + 0.1 mg L⁻¹ IBA produced the highest number of shoots per explant (9.67), whereas 1.0 mg L⁻¹ BAP without IBA promoted the greatest shoot elongation (2.34 cm). During the rooting phase, 1.50 mg L⁻¹ IBA produced the highest number of roots per explant (3.41), whereas 1.00 mg L⁻¹ IBA generated the greatest shoot length (4.12 cm). During ex vitro acclimatization, all plants survived (100% survival), but growth depended significantly on the substrate, with the moss treatment promoting the greatest development. In conclusion, an efficient micropropagation protocol was established for the wild “Naranja de Churuja” accession, with potential for mass propagation, germplasm conservation, and future biotechnological applications, including genetic transformation and genome editing.