The family Tymoviridae comprises positive-sense RNA viruses, which mainly infect plants. Recently, a few Tymoviridae-like viruses have been found in mosquitoes, which feed on vertebrate sources. We describe a novel Tymoviridae-like virus, putatively named, Guachaca virus (GUAV), isolated from Culex pipiens and Culex quinquefasciatus species of mosquitoes and collected in the rural area of Santa Marta, Colombia. After a cytopathic effect was observed in C6/36 cells, RNA was extracted and processed through the NetoVIR next-generation sequencing protocol, and data were analyzed through the VirMAP pipeline. Molecular and phenotypic characterization of the GUAV was achieved using a 5′/3′ RACE, transmission electron microscopy, amplification in vertebrate cells, and phylogenetic analysis. A cytopathic effect was observed in C6/36 cells three days post-infection. The GUAV genome was successfully assembled, and its polyadenylated 3′ end was corroborated. GUAV shared only 54.9% amino acid identity with its closest relative, Ek Balam virus, and was grouped with the latter and other unclassified insect-associated tymoviruses in a phylogenetic analysis. GUAV is a new member of a family previously described as comprising plant-infecting viruses, which seem to infect and replicate in mosquitoes. The sugar- and blood-feeding behavior of the Culex spp., implies a sustained contact with plants and vertebrates and justifies further studies to unravel the ecological scenario for transmission.

Rabies diagnosis is mainly made on fresh brain tissue postmortem by means of the direct immunofluorescence test. However, in some cases, it is not possible to use this technique, given that the affected nervous tissue goes through a postmortem degradation process, due to problems in the handling and transport of the samples. For this reason, the preservation in time of the rabies virus inclusions was assessed, as well as the immunoreactivity and the ultrastructure of viral particles in tissue with postmortem degradation. Brains of mice inoculated with rabies virus and control mice were processed for conventional histology, immunohistochemistry, electron microscopy, and immunoelectron microscopy in different postmortem times. In the processed tissues for hematoxylin and eosin, the presence of eosinophilic inclusions was not observed beyond 12 h postmortem. Surprisingly, the immunoreactivity of the viral antigens increased with time, at least until 30 h postmortem. It was possible to easily recognize the viral particles by means of conventional electron microscopy until 12 h postmortem. Immunoelectron microscopy allowed us to identify the presence of viral antigens disseminated in the neuronal cytoplasm until 30 h postmortem, but immunoreactive viral particles were not observed. The rabies infection did not cause histological or ultrastructural alterations different from those in the control group as a result of the postmortem degradation. In conclusion, the immunohistochemistry is a reliable test for rabies diagnosis in samples with postmortem degradation and that have been fixed with aldehydes.

We describe the localization of the KMP-11 protein in the Trypanosoma rangeli parasite determined by immunoelectron microscopy using a monoclonal antibody generated against the Trypanosoma cruzi KMP-11 protein. The data reported herein show that the T. rangeli KMP-11 protein is mainly accumulated in the parasite cytoplasm, the coat, the flagellum, and the flagellar pocket. The high degree of sequence homology between the KMP-11 proteins from both parasites suggests that the KMP-11 protein from T. rangeli, like that of T. cruzi, could also be associated with the parasite cytoskeleton.

Objetivos: Estudiar el efecto de la infección con rabia sobre la ultraestructura dendrítica de las neuronas piramidales de la corteza cerebral en ratones inoculados con el virus por vía intramuscular. Métodos: Ratones adultos inoculados con el virus de la rabia y ratones inoculados con solución vehículo sin el virus (controles) fueron fijados por perfusión intracardiaca, con una solución que contenía paraformaldehído al 4% y glutaraldehído al 2%, cuando los animales infectados manifestaron signos avanzados de la enfermedad. Los encéfalos fueron extraídos y cortados en plano coronal en un vibrátomo. Fragmentos pequeños y delgados de estos cortes, que contenían el área de la corteza cerebral motora, fueron procesados para microscopía electrónica de transmisión. Resultados: En las dendritas distales de las neuronas piramidales de los animales controles se observaron mitocondrias largas y estrechas, así como abundantes microtúbulos organizados en paralelo con la membrana celular. En las dendritas distales de las neuronas piramidales de los ratones infectados con el virus se observaron unas estructuras electrodensas de forma irregular semejantes a figuras de mielina, pero no se observaron las mitocondrias alargadas y los microtúbulos fueron escasos. Algunas dendritas también exhibieron la formación de vacuolas que interrumpían la continuidad del citoplasma y los microtúbulos. Conclusión: La infección con virus de la rabia generó cambios ultraestructurales en las dendritas de las neuronas piramidales corticales que aparentemente no se conocían. Estos resultados son coherentes con hallazgos previos, usando otras técnicas y modelos experimentales, en donde se ha demostrado patología dendrítica inducida por la infección con rabia.

Introducción. El sistema nervioso es uno de los blancos del virus del Zika. Es fundamental disponer de reactivos biológicos para apoyo diagnóstico e investigaciones sobre patogénesis que requieren tejidos fijados en aldehídos.Objetivo. Determinar la utilidad de dos antisueros elaborados para la detección de antígenos del virus del Zika en células y tejidos fijados en aldehídos.Materiales y métodos. Los antisueros se produjeron en conejos Nueva Zelanda a partir de un aislamiento viral del brote de Zika del 2016 en Colombia. En uno de los animales se empleó adyuvante de Freund para los refuerzos y, en el otro, el adyuvante Montanide. Se realizaron titulaciones por inmunorreacciones en células y tejidos positivos para el virus del Zika. Se emplearon los métodos de estreptavidina-fosfatasa alcalina y avidina-biotinaperoxidasa.Los antisueros se evaluaron en muestras infectadas experimentalmente para el virus del Zika y para otros virus relacionados y no relacionados; también, se evaluaron con muestras de otras técnicas utilizadas en el laboratorio, como cortes obtenidos con vibrátomo, muestras para microscopía óptica de alta resolución y microscopía electrónica de transmisión.Resultados. Hubo inmunorreactividad a los antígenos del virus del Zika con ambos antisueros, principalmente en las neuronas de la corteza cerebral. Se demostró inmunotinción en las muestras de cultivos celulares y en los tejidos de animales infectados experimentalmente. Hubo inmunorreactividad cruzada con los virus del dengue y de la fiebre amarilla, pero no con el virus de la rabia.